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糖原含量試劑盒說明書
糖原含量試劑盒說明書
更新時間:2019-04-18
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糖原含量試劑盒測定原理:
山东11选5走势图蒽酮法。利用強堿性提取液提取糖原,在強酸性條件下利用蒽酮顯色劑測定糖原含量。

糖原含量試劑盒說明書產品概述:

貨號:YC1131                                                 規格:100管/96樣

糖原含量試劑盒說明書

微量法

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

糖原是由葡萄糖單位構成的高分子多糖,是糖的主要的儲存形式之一,主要貯存在肝和肌肉中作為備用能量,分別稱為肝糖原和肌糖原。肝糖原可調節血糖濃度,當血糖升高時可在肝

臟合成糖原,血糖降低時,肝糖原則分解為葡萄糖以補充血糖。因此,肝糖原對維持血糖的相對平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的儲存形式,在劇烈運動消耗大量血糖時,肌糖原不能直接分解成血糖,必須先分解產生乳酸,隨血液循環到肝臟,通過糖異生轉變為肝糖原或葡萄糖。

測定原理:

蒽酮法。利用強堿性提取液提取糖原,在強酸性條件下利用蒽酮顯色劑測定糖原含量。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、濃硫酸(不允許快遞)和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:0.1mg/mL 的葡萄糖標準液 10mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:粉劑×1 瓶, 4℃保存;

糖原提取:

1﹑細胞或細菌:收集500~1000萬細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;加入0.75mL提取液超聲波破碎細菌或細胞(功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);轉移至10mL試管中,95℃水浴20min(蓋緊,防止水分散失),隔5min振搖試管1次,使充分混勻;取出試管冷卻后,用蒸餾水定容到5ml,混勻,8000g 25℃離心10min,取上清液待測。

2﹑組織:稱取0.1~0.2g樣品,加入0.75ml 提取液充分勻漿;轉移至10ml試管中;95℃水浴 20min(蓋緊,防止水分散失),隔5min振搖試管1次,使充分混勻;待組織全部溶解后,取出試管冷卻后,用蒸餾水定容到5ml,混勻,8000g 25℃離心10min,取上清液待測。

測定步驟

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至620nm,蒸餾水調零。

2、調節水浴鍋至95℃。

3、試劑二工作液的配制:在試劑二中倒入6mL蒸餾水,緩慢倒入24mL濃硫酸,充分溶解混勻后使用;用不完的試劑4℃保存一周;

4、加樣表(在 EP 管中反應) :

試劑(μL)

空白管  

標準管  

測定管

待測樣本  

 

 

60

試劑一

 

60

 

蒸餾水  

60

 

 

試劑二  

240  

240  

240

混勻,置95℃水浴10min(蓋緊,防止水分散失),冷卻,取200μL轉移至微量石英比色皿或 96孔板中,于620nm波長處,分別讀取空白管、標準管和測定管吸光度,分別記為 A1、A2 和 A3。

注意:1、空白管和標準管只要測一次。

2、如果 A3-A1大于2,需要將樣本用蒸餾水稀釋,計算公式中乘以相應稀釋倍數。

糖原含量的計算:

1、按照樣本質量計算

糖原(mg/g 鮮重)=1.11×(C 標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)

= 0.555×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W

2、按照蛋白質含量計算

糖原(mg/mg prot)=1.11×(C 標準×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)

=0.111×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷Cpr

1.11:是此法測得葡萄糖含量換算為糖原含量的常數,即 111ug 糖原用蒽酮試劑顯色相當于

100ug 葡萄糖用蒽酮所試劑顯示的顏色;C 標準管:標準管濃度,0.1mg/mL;V1:加入反應體系中待測樣本體積,0.06mL;V2:加入提取液體積,5mL; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。

注意:最低檢測限為 10ng/g  鮮重或 0.1ng/ mg prot 。

 

PUTAOTANGHANLIANGSHIJIHESHUOMINGSHU(CEZUZHI、XIJUNHUOXIBAO)

 

 

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