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ELISA法
发布时间:2013-12-16 点击次数:646次

ELISA

光度酶联免疫分析常被称为ELISA,即酶联免疫吸附分析。它zui早由EngvallPerlmannVan WeemanSchuurs同时建立,并用于医学研究。它利用酶标记物同抗原抗体复合物的免疫反应与酶的催化放大作用相结合,既保持了酶催化反应的敏感性,又保持了抗原抗体反应的特异性,因而极大地提高了灵敏度。同时它又是一种非均相分析,即在反应中的每一步都有洗涤过程,从而除去了未反应物质和干扰物质。

ELISA是将抗原、抗体的免疫反应和酶的催化反应有机结合而发展起来的一种综合性技术。它的基本原理是:使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性;抗原或抗体与某种酶联结成美标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体即保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,使受检标本和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,zui后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色产反应的深浅进行定性分析或定量分析。由于酶的催化效率很高,往往一分子酶在1min内可催化数十万及至上千万分子底物变为产物,故可极大地放大反应信号,从而使测定方法达到很高的灵敏度。从以上的原理可知,整个ELISA试验可分为三个部分:一是免疫学反应过程,包括抗原、抗体、酶标记物之间的反应;二是酶和底物反应过程,可以使用不同的酶/底物系统;三是检测方法的建立,可以利用已经存在的各种分析手段,对酶催化反应产生的产物进行定量分析,根据产物的理化性质,可采用分光光度法,也可采用荧光分析法、化学发光分析法、电化学分析法等分析方法。

N-US> pn�� �� yle='font-family:宋体;mso-ascii-font-family:"Times New Roman"; mso-hansi-font-family:"Times New Roman"'>或酶标定量测试仪”,其实这是不确切的,因为在学术上酶标是指用一定的方式,使酶与抗体(或抗原)蛋白质结合的过程.

 

 ,ELISA测试仪的使用方法:应将ELISA测试仪安装于温度,湿度相对稳定的干燥,清洁,安静的实验室里,电源电压可用交流电.使用时分校正仪器,测试样品,清洗比色皿三个环节.

   校正仪器:1,关上光门,插入所需之滤光片,并将量程选择开关转到T”100%”.2,接通电源,可见指示灯亮.3,预热15min以上.4,将仪器由调”0”开关调到表头指针为0.5,注入对照液,打开光门,调光量旋钮使表头指针为100%满度.6,将量程转到所需的A(光密度)量程范围,A旋钮调至0.

测定样品:1,安上抽液泵按钮,抽去对照液.2,放下按钮开关,用微量移液管(又叫微量液体取样器)注入样品,即可读数,样品测试程序由稀到浓。

清洗比色皿:开启抽液泵,清洗比色皿3次以上,才可测试不同组分的样品

,ELISA测试仪测定有关的辅助用具:ELISA测定中,其他有关的辅助用具有聚苯一乙烯塑料微量反应板和微量液体取样器.20世纪80年代,聚苯乙烯塑料微量反应板由上海塑料制品三厂生产,不同体积量的微量液体取样器,由上海求精玻璃仪器厂等厂家生产.聚苯乙烯塑料微量反应板质量与ELISA测试结果关系很大,尤其在使用四川第九仪表厂生产的ELISA测试仪时更为突出.

   21世纪随着科学技术的飞跃发展,ELISA测试仪的性能和外观都发生了较大的变化.


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