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冰冻干燥技术

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详细介绍

冰冻干燥技术

冰冻干燥就是使蛋白样品液在预先冰冻的状态下,用抽真空的方法,不经液态,直接升华,除去其中所含水分,并使样品蛋白成为干燥制剂的过程。在免疫酶技术中,所用的血清、酶等在溶液中容易变性腐败,制成干燥制剂后可长时间地在室温或冰箱(4℃)内保存而不失活,并且便于携带。

之所以要在冰冻是因为被干燥样品所含水分或溶剂由于周围空气压力的减少而增加蒸发速度,并且真空度愈高,溶液沸点越低,蒸发越快。

冰冻真空干燥与真空干燥和喷雾干燥相比,在实验中应用得更多更普遍。

  • 冰冻干燥血清的程序
  • 先将适量血清倾倒在适当大小的培养皿中(zui好样品液厚度在1cm以下),在低温—20℃以下)下冰冻成固态。
  • 在冰冻干燥装置中,分别放置固体氢氧化钠和五氧化二磷,真空干燥器上端抽气管通过五氧化二磷干燥管与真空泵相连。
  • 将冰冻血清块连同培养皿放进真空干燥器内,立即封闭干燥器(事先在盖沿涂上凡士林),开动油泵,一般经5-10h后,即可得冰冻干燥制剂。
  • 冰冻干燥完毕。首先逐渐打开干燥器顶盖玻璃阀,慢慢放气,待整个系统中压力上升到大气压后,取下样品干燥容器,zui后关闭真空油泵。

 2.讨论

(1)冰冻干燥的效果,取决于真空泵的真空度与口径合适的管道。真空油泵zui好选用抽空容量大的,所有接管应力求粗短。

    (2)样品如果是溶液,则zui好是水溶液,以避免有机溶剂降低冰点,进入泵内。浓度要适中,不低于1.5%。

  1. 样品如用缓冲液作为溶剂,zui好用有挥发性的,例如碳酸盐或醋酸盐缓冲液;若是非挥发性的,则要考虑pH和盐浓度对样品的影响。例如用pH7.0磷酸盐缓冲液,由于冰冻干燥时Na2盐比Na盐先结晶,pH降至约3.5,对样品有害。在样品液中加入少量的明胶、乳糖或葡萄糖等,有利于保存活性。
  2. 样品预冻时zui好先放在普通冰箱冷至0℃后,迅速移入一20℃以下的冰箱骤冷冻结。
  3. 在抽真空时,样品万一融化,必须重新预冻,并要检查原因。
  4. 抽真空约30min,如盛有预冻样品的容器结霜,表明运转良好。由于样品中水分的升华,温度降低,样品自然处于冰冻状态,不必在干燥器外边采取冷却措施。
  5. 干燥制剂装于小瓶,用蜡封口,贮于普通冰箱。

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