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總抗氧化能力(T-AOC)試劑盒說明書
點擊次數:52 發布時間:2019-12-11

總抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)試劑盒說明書

微量法

注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

研究意義:

測定對象中各種抗氧化物質和抗氧化酶等構成總抗氧化水平。在生物學、醫學和藥學研究中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液,細胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。

測定原理:

在酸性環境下,還原 Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)產生藍色的 Fe2+-TPTZ 的能力反映了總抗氧化能力。

自備實驗用品:

恒溫水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:液體 100mL×1 瓶,使用前預冷。

試劑一:液體 15mL×1 瓶,避光保存。

試劑二:液體 1.5mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑三:液體 1.5mL×1 瓶,避光保存。

混合液(現配現用):將試劑一、試劑二、試劑三按10:1:1的比例混合,使用前37℃預溫。

樣品的制備:

(1) 血清、血漿、唾液或尿液等液體樣品

血漿(制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝,不宜使用EDTA抗凝)4℃,5000rpm 離心10min,取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用于測定,也可以-80℃凍存(不宜超30d)后再測定。

(2) 組織樣品

按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

(3) 細胞樣品

按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎(功率200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);10000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

操作步驟:

1、分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長至593nm,蒸餾水調零。

 

 

 

 

 

2、操作表

 

空白管

測定管

混合液(μL)

180

180

樣品(μL)

 

6

雙蒸水(μL)

24

18

充分混勻,反應10min,于微量石英比色皿/96孔板,測定593nm吸光值,△A= A測定-A空白

注意:空白管只需測定一次。

總抗氧化能力計算公式:

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線:y=0.6308x+0.1291,R2=0.9989

(1)按樣本質量計算

總抗氧化能力(U/g)=(△A-0.1291)÷ 0.6308×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)

=53.9×(△A-0.1291)÷W

(2)按樣本蛋白濃度計算

總抗氧化能力(U/mg prot)=(△A-0.1291)÷0.6308×V 反總÷(V 樣×Cpr)

=53.9×(△A-0.1291)÷Cpr

(3)按細胞計算

總抗氧化能力(U/104cell)=(△A-0.1291)÷0.6308×V反總÷V樣×V樣總÷細胞數量(萬個)= 53.9×(△A-0.1291)÷ 細胞數量(萬個)

(4)按液體體積計算

總抗氧化能力(U/mL)=(△A-0.1291)÷0.6308×V 反總÷V 樣= 53.9×(△A-0.1291)

V 樣總:加入提取液體積,1 mL; V 反總:反應總體積,204μL;V 樣:反應中樣品體積,

6μL;W:樣品質量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

標準曲線:y=0.3154x+0.1291;R2=0.9989

(1)按樣本質量計算

總抗氧化能力(U/g)=(△A-0.1291)÷0.3154×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)

=107.8×(△A-0.1291)÷W

(2)按樣本蛋白濃度計算

總抗氧化能力(U/mg prot)=(△A-0.1291)÷0.3154×V 反總÷(V 樣×Cpr)

=107.8×(△A-0.1291)÷Cpr

(3) 按細胞計算

總抗氧化能力(U/104cell)=(△A-0.1291)÷0.3154×V反總÷V樣×V樣總÷細胞數量(萬個)= 107.8×(△A-0.1291)÷ 細胞數量(萬個)

(4)按液體體積計算

總抗氧化能力(U/mL)=(△A-0.1291)÷0.3154×V 反總÷V 樣= 107.8×(△A-0.1291)

V 樣總:加入提取液體積,1 mL; V 反總:反應總體積,204μL;V 樣:反應中樣品體積,

6μL;W:樣品質量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL

 

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